過表達慢病毒構建

簡要描述：慢病毒（Lentivirus）載體是以HIV-1（人類免疫缺陷I型病毒）為基礎發(fā)展起來的病毒載體。對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力，可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而達到持久性表達。在體外實驗及體內(nèi)實驗的研究中，慢病毒己經(jīng)成為表達外源基因或外源shRNA的常用載體形式之一，并且正在獲得越來越廣泛的應用。

更新時間：2024-10-26 00:00:00
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實驗流程：

利用限制性內(nèi)切酶消化獲得線性化載體。PCR 擴增制備目的基因片段。所用擴增引物在設計時需在其5'端添加同源重組序列(圖中以綠色和藍色標記)，使用該引物擴增目的基因片段，擴增產(chǎn)物5'和3'最末端的序列分別與線性化克隆載體兩末端序列完全一致。以線性化載體和目的基因擴增產(chǎn)物配制反應體系，進行重組反應,實現(xiàn)線性化載體和目的基因片段的體外環(huán)化。重組產(chǎn)物直接進行轉化，挑取平板上的單克隆進行PCR鑒定,對陽性克隆進行測序及結果分析。將正確克隆菌液打大培養(yǎng)、抽提,獲得高純度質(zhì)粒,用于后續(xù)實驗。

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