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實驗步驟
(1)75%酒精消毒孕鼠,在無菌條件下取出胎鼠,分離并切取脊髓,置于冷的無鈣、鎂的HBSS液的平皿中( 下置冰袋);
(2)解剖顯微鏡無菌條件下仔細剝離脊膜及血管;
(3)用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小,0.05%胰酶37℃消化15-20min,每五分鐘振蕩一次;
(4)去掉上清,加入終止液終止消化,吹打10-15次,不能有氣泡,收集上清,剩余組織再消化一次;
(5)4℃1000rpm離心10min,棄上清,加入種植液1重懸,培養箱內差速貼壁30min;
(6)收集上清,臺盼藍染色計數,按6×10^5cells/孔種入六孔板(種植液1),37℃,5%CO2,95%飽和濕度的培養箱中培養;
(7)培養第二天,全換液更換為種植液2;
(8)培養第四天,半量換液加入5uM的阿糖胞苷,24h全量換液;
(9)之后每周換液兩次。
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