透射電鏡實驗技術簡要介紹
樣本制備方法:
由于電鏡電子束穿透能力的限制,必須把標本切成厚度小于0.1um以下的薄片才適用,這種薄片稱為超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。
在透射電鏡的樣品制備方法中,超薄切片技術是最基本、最常用的制備技術。超薄切片的制作過程基本上和石蠟切片相似,需要經過取材、固定、脫水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步驟。
一取材的基本要求
組織從生物活體取下以后,如果不立即進行適當處理,會由于細胞內部各種酶的作用,出現細胞自溶現象。此外,還可能由于污染,微生物在組織內繁殖使細胞的微細結構遭受破壞。因此,為了使細胞結構盡可能保持生前狀態,必須做到快、小、準、冷:
(1).動作迅速,組織從活體取下后應在最短時間內(爭取在1分鐘內)投入2.5%戊二醛固定液。
(2).所取組織的體積要小,一般不超過1mm×1mm×1mm。也可將組織修成1mm×1mm×2mm大小長條形。因為固定劑的滲透能力較弱,組織塊如果太大,塊的內部將不能得到良好的固定。
(3).機械損傷要小,解剖器械應鋒利,操作宜輕,避免牽拉、挫傷與擠壓。
(4).操作最好在低溫(0℃~4℃)下進行,以降低酶的活性,防止細胞自溶。
(5).取材部位要準確。
取材方法:將取出的組織放在潔凈的蠟版上,滴一滴預冷的固定液,用兩片新的、鋒利的刀片成“拉鋸式”將組織切下并修小,然后用牙簽或鑷子將組織塊移至盛有冷的固定液的小瓶中。如果組織帶有較多的血液和組織液,應先用固定液洗幾遍,然后再切成小塊固定。