凋亡檢測實驗的目的:
掌上細胞凋亡細胞的形態特征
通過實驗通過用熒光探針對細胞進行雙重標記來檢測正常的活細胞,凋亡細胞和壞死細胞的方法。
1、取Falcon試管,按標本順序編好陰性對照管和標本管號。
2、使用冷的PBS緩沖液洗細胞兩次,再用1xBinding Buffer緩沖液制成1x106細胞/ml的懸液。試劑由優寧維生物提供。
3、Falcon試管中加入100μl 細胞懸液。
4、按以下體積加入AnnexinV與核酸染料:
5、輕輕混勻,室溫(20°C ~25°C)避光處放置15分鐘。
6、使用Annexin V-Biotin試劑進行檢測時:
1xBinding Buffer緩沖液洗細胞一次,去上清。
1xBinding Buffer緩沖液100µl溶解SAv-FITC試劑0.5µg,加入到細胞管中。
輕輕混勻。加入5µl PI,室溫(20-25°C)避光處放置15分鐘。
7、各試驗管中分別加入1xBinding Buffer緩沖液400µl。1小時內上流式細胞儀測定結果。
注意事項:
1、誘導培養 HL-60 細胞時間要準確;
2、熒光顯微鏡下觀察細胞時,由于熒光易碎滅,觀察時要盡量快。